Spjälknings Laboration (några frågor)

[s0s]

Vår uppgift var att spjälka koagulerat Albumin(äggvita) med hälp av Pepsin till mindre polypeptider så att lösligheten i vatten ökade.
Vi fick bestämma hydrolysens hastighet vid olika pH värden och vid närvaro av ett par metallsalter. Vi mätte även absorbansen med fotometer(350nm).

Vi fick undersöka 9 provrör, ett av dem fick följande tillsatser:
-Saltsyra, HCL 0.5
-Dest. vatten 4.1
-Pepsinlösn. 5.0
-Blynitrat, Pb(NO3)2 0.4
-Albumin 1.0
(cm^3)

pH visade sig vara ca. 1.3
fotometer, 0.08 , dvs ingen grumlighet

Alltså "trivdes" pepsin enzymet i lösningen och spjälkade nästan all albumin.
Hur ser reaktionen ut mellan pepsin & albumin, molekyl nivå?
Metallsalten drog ner på reaktions hastigheten, varför?

:confused:

[Allan]

Sverkeeeeeeeeer!!!!! :D


allan

[Sverker]

Jag har ingen bild att visa !

Pepsinet spjälkar/delar bindningen mellan olika aminosyror i albuminet. Det är peptidbindningen ( eg amidbindningen ) mellan aminogruppen på ena aminosyran och karboxylsyragruppen på den andra.

Istället för ett protein på flera hundra aminosyror som klumpar ihop sig med andra likadana protein så bildas kortare kedjor på 20 - 30 eller kanske 50 aminosyror som nu simmar fritt = klar vätska i provröret.

Bly är ett gift ! Det binder till proteinerna och blockerar pepsinet.

[s0s]

tack

Vad har HCl för inverkan på spjälkningen/reaktionen, alltså vad bidrar den med(sur=väte) ?

Har för mig att läraren sa att blynitrat bildar ett komplex(?) med pesin och oskadligör den, vad menar hon?

Om bly påverkar enzymets funktionduglighet hur kan spjälkningen fortgå, räcker inte mängden bly?

[Sverker]

Pepsin är ett enzym som arbetar bäst vid låga pH, optimum är vid pH 1.2.
Enzymet arbetar mycket långsamt vid högre pH.

Jag är ingen expert på bly. För mig så tar bly järnets plats när de röda blodkropparna bildas och man får helt enkelt blodbrist/anemi när man utsätts för bly.

Däremot bildar blyjonen lösa komplex med protein i sur miljö. Blyet binder in till proteinet och gör att det inte kan arbeta. Komplexet är svagt och efter en stund så lossnar blyet och proteinet blir aktivt igen en liten stund innan blyet blockerar igen. Så håller det på. Desto mer bly du tillsätter desto oftare är enzymet blockerat och det sker ingen nedbrytning av äggalbuminet.

[Mehdi]

Letar du efter reaktionsmekanism mellan pepsin och albumin eller (bild på reaktionen)?

Att reaktionshastigheten minska pg av blyet beror nog pg av ändrad elektronegativitet av molekylen; ändrar form och tillgänglighet då aktiva ytan ändras. Komplex är väl ingen kemiskbindning utan typ.... erhm... hmm... bildar "agregat" av enzymet. Typ låser in enzymet och låter den inte reagera med proteinet. Eller vad säger du Sverker? :em:

[Sverker]

Ja, jag säger ungefär samma "Typ låser in enzymet och låter den inte reagera med proteinet."

Svaga bindningar mellan possitivt laddat bly Pb2+ och någon negativt laddad del av pepsinenzymet. Den delen kan ju vara en fosfatgrupp eller något annat.